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離心機是蛋白表達通關裝備之一

發(fā)布時間:2020-12-17 14:38:21??????點擊:

  想要通關蛋白表達少不了離心機。常言道細節(jié)決定成敗,尤其像蛋白表達提純這樣復雜的實驗。一個操作上的小失誤,可能直接影響最終結果。

  雖然可以大致分為三步,表達、分離、純化,但是這個過程十分繁瑣。

  蛋白表達前期還有一系列復雜過程,耗費時間也長,到最后一步,還不能放松警惕。

  蛋白進行純化是通關的最后一步,選擇合適的純化方法,可以提高蛋白的純化效率,讓蛋白純化簡單便捷。常用的方法有:親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、疏水層析等。

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  親和層析

  親和層析純化是利用生物大分子物質(zhì)具有與某些相應的分子專一性可逆結合的特性進行蛋白純化的技術。

  離子交換層析

  離子交換層析是一種依據(jù)蛋白表面所帶電荷量不同進行蛋白分離純化的技術。

  凝膠過濾層析

  凝膠過濾(也叫排阻層析或分子篩)是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。

  疏水作用層析

  疏水作用層析是利用鹽-水體系中樣品分子的疏水基團和層析介質(zhì)的疏水配基之間疏水力的不同而進行分離的一種層析方法。

  雖然方法多種多樣,但是,都需要用離心機來進行分離純化。

  用脂肪氧合酶重組蛋白的誘導為例:

  1.接種含有重組脂肪氧合酶蛋白的大腸桿菌BL21菌株于5 mL LB液體培養(yǎng)基中(含100 ug/mL 氨芐青霉素),37℃震蕩培養(yǎng)過夜。

  2.按1∶50或1:100的比例稀釋過夜菌,一般轉(zhuǎn)接1 mL過夜培養(yǎng)物于100 mL(含100 ug/mL 氨芐青霉素)LB液體培養(yǎng)基中,37℃震蕩培養(yǎng)至OD600 = 0.6 - 0.8(最好0.6,大約需3 h)。取10 ul 樣品用于SDS-PAGE 分析。

  3.對照組不加誘導劑,實驗組加入IPTG至終濃度0.5 mmol/l,37℃繼續(xù)培養(yǎng)1-3h。

  4.離心機12000 rpm 離心10 min,棄上清,菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。

  以上就是關于蛋白表達的通關講解,本文重點就是要表達,一個實驗的成敗,細節(jié)很關鍵,雖然人工方面是可以人為把控的,但是輔助設備的細節(jié),還是要多加注意,選一臺合適的離心機很關鍵。


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